干货分享:小鼠疾病模型、细胞/动物模型定量蛋白质组学
在众多小鼠模型中,经典基因敲除、条件性敲除以及敲入小鼠模型最为常用。贝赛模式针对人源或鼠源细胞/动物模型样品,推出定量蛋白质组学解决方案。通过比较不同细胞/动物模型样品组间的蛋白质组定量差异,结合生物信息学,解析不同样品组间差异的分子基础,提示关键的差异蛋白或信号通路。
细胞、组织、以及整体水平,1)研究线粒体ROS信号及钙信号调控;2)探讨线粒体形态改变(融合/分裂)机制及其病理生理意义;3)结合基因组及蛋白质组学研究手段,筛选线粒体钙离子通道及膜转运孔道相关蛋白,研究其对线粒体形态和功能的影响,并寻找针对线粒体疾病治疗的可能药物靶点。
对传染性疾病,如结核病、艾滋病、SARS、禽流感、甲型H1N1流感等疾病的研究。应用数据挖掘技术对传染性疾病的数据进行分析,找出传染性疾病的发病规律,揭示传染性疾病的病因,进一步摸索出传染性疾病的变异规律,建立传染性疾病的预测模型。 2 对慢性非传染性疾病,如恶性肿瘤、脑血管病、心脏病、糖尿病等疾病的研究。
全书分为上下两部分,上篇详尽讲解了蛋白质组学研究的核心内容,包括基本原理、实验技术以及生物信息学在理解蛋白质结构和功能中的关键作用。
如何研究一个基因的功能?
研究基因功能方法,简介如下:基因转导技术:用物理的、化学的或生物学的方法将目的基因导入受体细胞的一种技术。反义核苷酸技术:通过碱基互补原理,干扰基因的解旋、复制、转录、信使核糖核酸的剪接加工乃至输出和翻译等各个环节,从而调节细胞的生长、分化。
有很多方法 敲除:看造成了什么影响。过表达:很多基因的表达强度取决于它的重复次数,将一个片段大量重复后,看哪个性状有明显增强。转移:将基因转移到大肠杆菌等细菌内,检测是否表达了新的蛋白质,然后研究新蛋白的功能。
研究方法有二:计算机预测基因功能、实验确认基因功能。
遗传分析是传统的研究基因功能的方法。通过表型来寻找引起功能异常的突变,但是寻找点突变无异于大海捞针,非常困难。正向遗传学方法,用物理方法或化学诱变剂造成的许多突变,通过表型来研究基因功能,该方法局限在于涉及多点、多个基因的变化,而且很难确定是哪个基因在起作用。
如何制备双基因敲除小鼠
得到双重基因敲除小鼠需要经过专业的胚胎发育敲除。基因敲除是用含有一定已知序列的DNA片段与受体细胞基因组中序列相同或相近的基因发生同源重组,整合至受体细胞基因组中并得到表达的一种外源DNA导入技术。
基因敲除/,用g418筛选转染后的胚胎干细胞.体外转录sgrna/。
基因敲除小鼠制备的流程是准备小鼠胚胎,按照实验要求敲除培育。基因敲除就是通过同源重组将外源基因定点整合入靶细胞基因组上某一确定的位点,以达到定点修饰改造染色体上某一基因的目的的一种技术。它克服了随机整合的盲目性和偶然性,是一种理想的修饰、改造生物遗传物质的方法。
一般地,筛选使用正、负选择法,比如用G418筛选所有能表达neo基因的细胞,然后用Ganciclovir淘汰所有HSV-TK正常表达的细胞,剩下的细胞为命中的细胞。将筛选出来的靶细胞导入鼠的囊胚中,再将此囊胚植人假孕母鼠体内,使其发育成嵌合体小鼠。
关于蛋白质组学检测结果分析求助
1、蛋白质鉴定:可以利用一维电泳和二维电泳并结合Western等技术,利用蛋白质芯片和抗体芯片及免疫共沉淀等技术对蛋白质进行鉴定研究。翻译后修饰:很多mRNA表达产生的蛋白质要经历翻译后修饰如磷酸化,糖基化,酶原激活等。
2、利用如STRING、BioGRID等数据库,构建蛋白质之间的相互作用网络。(2)识别关键蛋白或亚网络,它们可能在疾病或特定生物过程中起到中心作用。验证:使用西方印迹、免疫荧光等技术,对筛选出的关键差异蛋白进行实验验证。
3、经过这几步的判断之后,可以得到一个初步的结果,比如说谱图数量是否和之前的结果差不多,质量精度及鉴定率如何,高丰度蛋白的存在与否,是否受污染,分离效率如何,定量是否准确,标记效率是否ok,等等,这些信息都可以得到。这样,我们最终可以得到一个准确可靠的蛋白质组学鉴定或定量结果用于后续的分析了。
talens详细资料大全
1、TALENs(transcription activator-like (TAL) effector nucleases)的中文名为转录激活因子样效应物核酸酶,是基因组编辑核酸酶三大类之一。它是实现基因敲除、敲入或转录激活等靶向基因组编辑的里程碑。
2、在这一方面,其它基因编辑方法,如锌指核酸酶(ZFN)和 TALENS 可能要比 Cas - gRNA 更为具有优势,因为这两者需要识别更长的靶标 DNA 序列。
3、毛笔的起源:史记中曾记载:「秦始皇命太子扶苏与蒙恬筑长城以御北方匈奴,蒙恬取山中之兔毛以造笔」,文房四谱上也记载:「昔日蒙恬造笔,以拓木为管,鹿毛为柱,兔毛为被,此乃谓苍毫也」,博物志云:「秦之蒙恬将军取狐狸毛为柱,兔毫为被以书」,因此,我们通常称蒙恬将军为毛笔的史祖。